ADN viral hepatita B (cantitativ)

Informatii generale

Desi sunt disponibile vaccinuri eficiente, infectia cu virusul hepatitei B continua sa ramana o problema grava de sanatate publica.

Peste 2 miliarde de persoane din intreaga lume prezinta dovada serologica a infectiei HBV (in antecedente sau curenta), dintre care 350-400 milioane sunt in stadiul de infectie cronica. Hepatita cronica cu virus B reprezinta a 10-a cauza de mortalitate, iar aproximativ 320.000 persoane mor anual datorita carcinomului hepatic asociat cu infectia HBV.

Au fost raportate 8 genotipuri HBV (notate cu majuscule de la A la H), avand distributii geografice diferite8.

Markerii serologici sunt folositi adesea ca indicatori de diagnostic si/sau prognostic ai infectiei HBV acute sau cronice. Dintre acestia, AgHBe reprezinta un marker de infectiozitate si un indicator al replicarii virale active, asociat cu boala hepatica progresiva2. Totusi, existenta unor tulpini virale care fie produc AgHBe dar acesta nu este detectabil in ser, fie si-au pierdut capacitatea de a produce AgHBe chiar in prezenta unei infectii active, limiteaza utilitatea clinica a acestui marker5.

Cea mai eficienta si directa metoda, cu valoare prognostica in evolutia infectiilor acute sau cronice, este detectarea cantitativa a ADN-ului HBV din plasma, prin tehnologia PCR. In plus, aceasta metoda permite depistarea ADN-HBV in cazurile de hepatita cronica B cu markeri serologici negativi.

Determinarea viremiei este utila de asemenea pentru monitorizarea eficientei terapiei antivirale. Studiile au demonstrat ca o scadere rapida si sustinuta a nivelului ADN-HBV la pacientii aflati sub tratament cu α-interferon, lamivudina, adefovir sau dipivoxil reprezinta un factor predictiv pentru un raspuns terapeutic favorabil. Pe de alta parte, monitorizarea viremiei poate avea valoare predictiva in ceea ce priveste dezvoltarea rezistentei la lamivudina7.

Recoltarea

Specimen recoltat – sange venos7.

Recipient de recoltare – vacutainer ce contine EDTA ca anticoagulant7.

Cantitate recoltata – cat permite vacuumul7

Cauze de respingere a probei – folosirea heparinei ca anticoagulant7.

Prelucrare necesara dupa recoltare – se separa plasma in maxim 1 zi de la recoltare prin centrifugare la 800-1600 x g timp de 20 de minute la temperatura camerei, apoi se transfera intr-o eprubeta de polipropilen (sunt necesari min. 2mL de plasma) 7.

Stabilitate proba – plasma separata poate fi pastrata timp de 72 de ore la temperatura camerei, 7 zile la 2-8°C sau cel putin 6 saptamani congelata la  -80°C. Probele pot fi congelate/decongelate de maximum cinci ori fara pierderea ADN-ului VHB7.

Metoda si interpretarea rezultatelor

Metoda – Real-time PCR (TaqMan): reactie de polimerizare in lant cu detectie in timp real a produsului PCR  acumulat, prin masurarea fluorescentei emise.

Mentiune: procesarea probelor se face automat⁷.

Factor de conversie:  HBV-DNA (UI/mL) x5.82 = HBV-DNA (copii/mL).

Valori de referinta – ADN-HBV nedetectabil; limita de detectie a metodei in domeniul de linearitate este de 20 UI/mL; sensibilitatea analitica: 9 UI/mL. Un rezultat «nedetectabil» semnifica faptul ca este vorba fie de o viremie foarte scazuta (sub limita de cuantificare), fie de o viremie absenta⁷.

Interpretarea rezultatelor

•Nivelul viremiei poate fi corelat cu markerii serologici, biochimici si cu rezultatele biopsiei hepatice, pentru a indica faza infectiei cronice HBV¹:

Observatie: Deoarece in urma unor studii prospective s-a constatat prezenta afectarii hepatice la un grup de pacienti cu viremie scazuta (<10⁵ copii/mL, incadrati in stadiul de purtator inactiv) s-a propus ca la pacientii cu hepatita cronica HBV AgHBe (-) cut-off-ul ADN-HBV pentru inflamatia hepatica sa se reduca de la 10⁵ copii/mL la 3×10⁴ copii/mL. Acest nou cut-off are o sensibilitate de 93%, iar toate persoanele cu infectie VHB inactiva au nivelul ADN-HBV sub 3×10⁴ copii/mL⁴.

•Nivelurile inalte de ADN-HBV se asociaza cu un risc crescut de carcinom hepatocelular⁶.

•Una din tintele tratamentului antiviral este obtinerea raspunsului virusologic definit prin scaderea ADN-HBV sub 10⁵ copii/mL³.

Limite si interferente

Acest tip de test a fost validat doar pentru plasma recoltata pe EDTA. Analiza altor tipuri de probe poate duce la rezultate fals pozitive sau fals negative. Heparina inhiba metoda PCR7.