Determinare crioglobuline

Informatii generale

Crioglobulinele sunt proteine din clasa imunoglobulinelor care precipita reversibil la temperaturi scazute (0-4ºC) si se resolubilizeaza la 37ºC. Studii recente au aratat ca temperatura la care precipita crioglobulinele variaza in functie de concentratia serica a proteinelor; astfel cresterea concentratiei proteinelor determina cresterea temperaturii la care precipita crioglobulinele. De asemenea, exista diferente in functie de tipul imunoglobulinelor: IgM precipita la temperaturi mai scazute decat IgG.

Ocazional, IgM prezinta 2 proprietati: crioprecipitare si capacitatea de a aglutina hematiile prin anticorpi la rece (aglutinine la rece). Nu toate crioglobulinele sunt insa aglutinine la rece, deoarece nu detin unele din proprietatile acestor anticorpi.

Sunt descrise 3 tipuri de crioglobuline:

– tip I: alcatuite dintr-un singur tip de imunoglobulina (IgG sau IgM) omogena  monoclonala care formeaza adesea un precipitat mare, intr-un interval de 24 ore de la plasarea serului in frigider; de obicei concentratia crioglobulinelor depaseste 5 mg/mL;

-tip II: crioglobuline mixte alcatuite dintr-un component monoclonal (de obicei IgM care are activitate de factor reumatoid) si o componenta policlonala (IgG) care formeaza in majoritatea cazurilor un precipitat mic la 4ºC intr-un interval de 1-7 zile; de obicei  concentratia crioglobulinelor este mai mare de 1 mg/mL;

-tip III: crioglobuline mixte alcatuite din 2 sau mai multe imunoglobuline policlonale apartinand mai multor clase, care formeaza la 4ºC precipitate foarte mici, adesea gelatinoase, intr-un interval de timp mai mare decat in cazul celorlaltor tipuri de crioglobuline (pana la 7 zile); de obicei concentratia crioglobulinelor este mai mica de 1 mg/mL³.

In urma precipitarii crioglobulinelor se produc obstructii ale vaselor mici care pot determina urmatoarele manifestari clinice: purpura, fenomene de tip Raynaud, necroza a extremitatilor¹.

Crioglobulinemiile pot fi esentiale (idiopatice) sau secundare. In tabelul de mai jos sunt mentionate afectiunile asociate celor 3 tipuri de crioglobuline³:

Pacientii cu lupus eritematos sistemic si factor reumatoid negativ care prezinta crioglobuline dezvolta mai frecvent afectare renala decat cei cu factor reumatoid pozitiv si crioglobuline absente¹.

Numeroase studii au aratat ca multe cazuri (42-98%) de crioglobulinemie mixta idiopatica (tip II sau III) sunt de fapt secundare infectiei cu virusul hepatitei C³.

Recomandari pentru determinarea crioglobulinelor – depistarea crioglobulinelor la pacienti cu simptome declansate in urma expunerii la frig (purpura, urticarie, necroza digitala, fenomene Raynaud), infectia cronica cu virusul hepatitei C, macroglobulinemia Waldenström, leucemia limfatica cronica, colagenoze^1;2.

Recoltarea

Pregatire pacient – à jeun (pe nemancate)2;3.

Specimen recoltat – sange venos2;3.

Recipient de recoltare – vacutainer fara aditivi, preincalzit la 37 ºC; este exclusa utilizarea tubului cu gel separator 2;3.

Cantitate recoltata – 5 mL 2;3

Prelucrare necesara dupa recoltare – tubul de recoltare preincalzit la 37ºC se reintroduce imediat dupa prelevarea sangelui la 37ºC si se lasa pana cand se produce coagularea; apoi, serul se separa prin centrifugare, se decanteaza si se transfera intr-o eprubeta la 4ºC2;3.

Cauze de respingere a probei – specimen care nu a coagulat la 37ºC 2;3.

Metoda si interpretarea rezultatelor

Metoda – precipitarea crioglobulinelor la 4ºC1;2;3

Valori de referinta – crioglobuline absente dupa 7 zile de pastrare a serului la 4ºC2;3.

Interpretarea rezultatelor

Dupa 24 ore, proba de ser pastrata la 4ºC se examineaza pentru a se identifica eventuala formare a unui depozit albicios; daca acesta este prezent, serul este incalzit la 37ºC intr-o baie de apa pentru a urmari dizolvarea precipitatului si apoi va fi plasat din nou in frigider, pentru a demonstra ca precipitatul se formeaza in mod repetat. Daca dupa 24 ore nu se observa formarea precipitatului, proba este introdusa din nou la 4ºC si examinata dupa 7 zile2;3.

Limite si interferente

Testul, fiind calitativ, indica doar prezenta sau absenta crioglobulinelor. Pentru analiza prezentei componentelor monoclonale sau policlonale este necesar testul de imunofixare3.

Rezultate fals pozitive pot sa apara in cazul serurilor lipemice si in situatia in care se folosesc la recoltarea probei vacutainere cu anticoagulant.

Rezultate fals negative pot sa apara daca vacutainerul nu a fost preincalzit la 37ºC, proba nu a fost tinuta la 37ºC pana la formarea coagulului, sau a fost centrifugata la temperaturi mai mici de 37ºC2.