HPV (Papiloma Virus Uman) ADN-genotipare

Informatii generale

Infectia HPV este implicata in marea majoritate a cazurilor de cancer cervical3. Pe baza potentialului oncogen tipurile genitale de HPV sunt impartite in tipuri cu risc scazut si tipuri cu risc crescut.

Tipurile HPV cu risc scazut sunt asociate in mod caracteristic cu verucile (condiloamele) genitale, in timp ce tipurile cu risc crescut sunt responsabile de aparitia cancerului invaziv.

In cadrul tipurilor oncogene de HPV tipul 16 determina peste 50% din cazurile de cancer cervical, iar tipul 18 este implicat in 10-20% din cazuri6.

Intr-un studiu la care au participat peste 20 000 de femei incidenta cumulata (pe o perioada de 10 ani) a leziunilor intraepiteliale de tip CIN3 si a cancerului cervical a fost de 17% si, respectiv, 14% la persoanele infectate cu tipurile HPV 16 si 18 la inrolarea in studiu. Comparativ, s-a obtinut o incidenta de 3% pentru celelalte tipuri HPV oncogene. Luand in considerare doar persoanele ≥ 30 ani avand citologie cervicala negativa incidentele cumulate pentru tipurile HPV 18, HPV 16 si alte tipuri HPV oncogene au fost de de 21%, 18% si, respectiv, 2%3.

Pe baza acestor date si a altor rezultate similare ghidul ASCCP (American Society for Colposcopy and Cervical Pathology) din 2006 recomanda utilizarea unui test de genotipare HPV pentru tipurile 16 si 18 la pacientele ≥ 30 ani cu citologie negativa si ADN-HPV detectie tipuri cu risc crescut pozitiv. Scopul acestui test este de a tria pacientele pozitive pentru HPV 16 sau 18 care trebuie trimise imediat la colposcopie de cele negative, la care se recomanda repetarea citologiei si ADN-HPV detectie tipuri oncogene peste 12 luni. Testul a primit aprobarea FDA in martie 2009. Desi ASCCP nu recomanda genotiparea HPV la pacientele cu citologie ASC-US (“celule scuamoase anormale de semnificatie nedeterminata”), FDA a aprobat ca testul HPV 16/18 sa fie folosit ca adjuvant in managementul acestor paciente2.

In iunie 2006 FDA (Food and Drug Administration) a aprobat in SUA utilizarea vaccinului Gardasil produs de compania Merck & Co. Inc. pentru profilaxia infectiilor induse de anumite tipuri de HPV. Gardasil este un vaccin recombinat tetravalent ce actioneaza impotriva tipurilor HPV 6, 11, 16 si 18 si este indicat pacientelor tinere (9-26 ani).Tipurile 16 si 18 sunt responsabile de producerea a 70% din cazurile de cancer cervical asociate cu HPV, in timp ce tipurile 6 si 11 sunt implicate in etiologia a 90% din cazurile de leziuni anogenitale benigne (condiloame). Avand in vedere compozitia sa, vaccinul nu poate preveni cazurile de cancer cervical induse de alte tipuri de HPV, astfel ca va fi necesara continuarea programelor de screening1.

Pe masura ce vaccinul va incepe sa fie utilizat pe o scara larga, testarea ADN HPV va dobandi o importanta si mai mare in monitorizarea infectiilor, mai ales daca va fi asociata cu genotiparea HPV5.

Testul efectuat in laboratorul Synevo utilizeaza amplificarea ADN-ului tinta prin tehnica PCR si hibridizarea acizilor nucleici, pentru detectarea calitativa individuala (genotipare) a 37 tipuri anogenitale de HPV: 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 40, 42, 45, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73(MM9), 81, 82(MM4), 83(MM7), 84(MM8), IS39 si CP6108, in celule cervicale colectate in mediu lichid4.

Indicatiile efectuarii testului de genotipare sunt urmatoarele:
-monitorizarea evolutiei infectiei determinate de un anumit tip HPV;
-monitorizarea persistentei genotipurilor asociate cu risc crescut de cancer cervical, in special la pacientele cu citologie negativa5;
-femei ≥ 30 ani cu citologie negativa si ADN-HPV detectie tipuri cu risc crescut pozitiv;
-femei cu citologie ASC-US si ADN-HPV detectie tipuri cu risc crescut pozitiv2;
-monitorizarea eficientei tratamentului in cazul leziunilor cervicale asociate cu HPV (conizatie, radioterapie sau chimioterapie);
-genotiparea pre- si postvaccinala in programe selectionate de screening;
-facilitarea investigatiilor epidemiologice referitoare la evolutia naturala a infectiilor HPV4.

Recoltarea

Pregatire paciente – vezi recomandarile de la testul ADN HPV – detectie tipuri oncogene.

Specimen recoltat – celule cervicale colectate in mediu lichid; recoltarea va fi efectuata cu ajutorul periutei cervicale Cervex-Brush4.

Stabilitate proba – celulele cervicale colectate in mediul PreservCyt sunt stabile 21 zile la temperatura camerei si 8 saptamani la 2-8ºC2

Metoda

Metoda – reactie de polimerizare in lant (PCR) cu detectie colorimetrica; genotiparea este efectuata cu ajutorul unui strip ce contine sondele specifice intr-o dispozitie lineara4.

Valori de referinta – ADN HPV nedetectabil; limita de detectie a metodei de lucru este de 120, 815, 1920 si 251 copii/mL pentru genotipurile 16, 18, 31 si 45.

Un rezultat pozitiv include comunicarea genotipurilor HPV prezente in proba4.

Limite si interferente

Acest test a fost validat numai pentru utilizarea celulelor cervicale colectate in mediu lichid; folosirea altor tipuri de probe poate conduce la rezultate neconcludente.

Detectarea ADN HPV este dependenta de cantitatea de genom viral prezent in proba, care poate fi influentata de modul de recoltare, varsta pacientei si stadiul infectiei.

Probele care contin sange intr-un procent mai mare de 3.5% pot inhiba reactia PCR si conduce la rezultate fals negative. Prezenta mucusului cervical nu interfera cu testul4.